DNA病毒基因组提取试剂盒

产品货号：

QN0889

中文名称：

DNA病毒基因组提取试剂盒

英文名称：

DNA Viral Genome Extraction Kit

产品规格：

50T|100T

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组，不适合于RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

产品组成

保存：室温(15℃～25℃)干燥保存，其中蛋白酶K需置于-20℃保存，有效期12个月。本试剂盒2～8℃保存时间更长。

使用方法

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

取病毒上清液0.5mL，12000rpm离心5min，尽量吸尽上清使用，弃去沉淀。
向病毒上清中加入20μL的蛋白酶K（10mg/ml），充分混匀，65℃消化10～20min，期间可颠倒离心管混匀数次。
向管中加入500μL溶液V，充分混匀。再向管中加入400μL无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置2min。（吸附柱的最大容积为750μL，可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。）
12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
向吸附柱中加入600μL漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
12000rpm离心2min，将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50μL～100μL经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。
离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心2min，即可得到高质量的病毒基因组DNA。

样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
若溶液V中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解再使用，不影响效果。
洗脱缓冲液的体积最好不少于50μL，体积过小会影响回收效率。洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。D260值为1.0相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7～1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
如果病毒含量过低，最后提取的基因组DNA电泳可能无法检测到，但PCR等其他实验还会有结果。

产品目录